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原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株

作者:天木生物 发布时间:2018/10/24 浏览量:69

原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株

中国抗生素杂志

  本期向您推荐广东容大生物股份有限公司在《中国抗生素杂志》上发表的一篇《原生质体ARTP诱变选育阿维拉霉素高产菌株》的研究论文。

文章简要内容如下:

  筛选获得阿维拉霉素A含量高的菌株,进一步提高绿色产色链霉菌(Streptomyces viridochromogene)发酵阿维拉霉素的水平。对绿色产色链霉菌AVL4(S. viridochromogene AVL4)菌株原生质体制备及再生条件进行了优化,并在此基础上,采用ARTP诱变系统对其原生质体进行了诱变研究。S. viridochromogene AVL4原生质体制备和再生的最佳条件为:以活化斜面转接至种子摇瓶培养24h的菌丝体为出发菌丝体,以SMM溶液作为渗透压稳定剂,采用12 mg/mL的溶壁酶,30℃酶解反应60 min。以原生质体为诱变对象,ARTP处理40s后的菌株经菌落形态初筛和摇瓶发酵复筛,获得一株编号S251的菌株,其摇瓶发酵阿维拉霉素的生物效价较出发菌株提高19.3%,其中,阿维拉霉素A占组分含量81%,较原始出发菌株AVL4含量提高6.4%,而且斜面连续转接五代遗传相对稳定。另外,成功实现变株S251的50L罐发酵验证,其产素水平最高达到4500 U/mL,较对照菌株AVL4提高27.4%。结论 ARTP处理AVL4菌株原生质体,能够有效提高绿色产色链霉菌产阿维拉霉素的能力,获得的变株S251具有非常好的生产阿维拉霉素的工业化应用潜力。

文章精选内容如下:

  根据ARTP诱变后再生菌落的形态特征,初步筛选共挑取异形单菌落32个,通过点植法移接至另一平板,最后接种至指示菌平板,以出发菌株为对照,观察突变株的抑菌活性,检测生物效价。其中编号S11、S28、S91和S215的菌株抑菌圈直径较对照菌株明显要大(抑菌圈直径相较对照菌株超过15%),将此4株菌进行斜面保存。

  将初筛获得的突变株斜面进一步进行摇瓶发酵复筛,以出发菌株为对照,最终得到两株优良突变株S91和S215,其管碟法测得的抑菌圈直径分别为15.6和16.1 mm,阿维拉霉素生物效价为705.1和727.7 U/mL,较出发菌株分别提高15.6%和19.3%。其中突变株S91的阿维拉霉素A含量为521.4 μg/mL,占组分含量约73.9%,较出发菌株A的占比含量下降2.9%。突变株S251的阿维拉霉素A含量为589.4 μg/mL,占组分含量81%,较原始出发菌株A含量提高6.4%。


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图3 ARTP处理时间对S. viridochromogene原生质体致死率的影响

Fig.3 The hereditary stability of mutant strains 


表1 斜面传代对突变株S251生物效价及阿维拉霉素A含量的影响

Tab.1 Effects of slope passage on biological effect and avilamycin A content of mutant S251

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