天木生物MISS cell助力放线菌分离培养和高通量筛选

      放线菌（Actinomycetes）是一种原核生物类群，在自然界中分布很广，是一类极其重要的微生物资源，与人类的生产和生活关系极为密切，最突出的特性就是能产生大量的、种类繁多的抗生素。放线菌能形成分枝菌丝和分生孢子，呈菌丝状生长，主要通过形成无性孢子的方式进行繁殖，也可借菌体分裂片段繁殖。放线菌长到一定阶段，一部分气生菌丝形成孢子丝，孢子丝成熟便分化形成许多孢子，称为分生孢子。

图1 放线菌模式图

图2 放线菌的气生菌丝和孢子丝

      由于孢子因其体积小、质轻、易飘散等特点，极易造成同一固体平板上的不同单克隆菌落间产生交叉污染问题，给放线菌的培养和分离带来了巨大挑战。

二、使用MISS cell分离培养放线菌

1.样品预处理，确定上机浓度

图3 样本处理工作流程

2.MISS cell分离培养

      本实验共生成2500个液滴，培养96h后进行检测及分选，经过60分钟的分选，共得到含菌液滴约500个，MISS cell仪器工作流程如下图所示。

图4 MISS cell工作流程

3.实验结果

1）生长速率对比：不同时间点观察液滴及平板放线菌生长情况，液滴培养1天后液滴中出现生长，平板培养6天后出现菌丝生长，液滴培养放线菌生长速率显著优于平板培养，放线菌的最佳培养分选时间为4天。

图5 放线菌在固体平板上的生长情况

图6 放线菌在液滴中的生长情况

图7 放线菌培养4天，在OD模式下的分选情况

图8 放线菌培养4天，在荧光模式下的分选情况